希望的田野｜夏啖荔乡共富果

制法：先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃葑压灭菌：15min，放成斜面。

一、材料与方法1、主要仪器以及试剂（1）仪器KQ-500DE数控超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)、101型电热鼓风干燥箱(北京市永光明医疗仪器有限公司)、LX-07A万能高速粉碎机(红光工贸有限公司)、EL204-IC电子分析天平(杭州汇尔仪器设备有限公司)、800型离心机(上海手术器械厂)、T6新世纪可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)、SHZ-D(Ⅲ)循环水真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)、RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、FD-1-50冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司)。3、没食子酸标准液的配制在电子分析天平上称取0.0145g没食子酸标准品于烧杯中，溶解，转移至50mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释至刻度。

科学研究表明：茶多酚具有抗氧化、抗衰老、清除自由基、抗菌、抗癌、降低血脂等多种生理功能和药理功效，在食品、医药、保健、化工等诸多领域具有广阔的应用前景，因此从茶叶中提取及纯化茶多酚日益受到广大学者的关注。福林酚(B.R，国药集团化学试剂有限公司)。茶叶残渣用40℃，100mL蒸馏水超声提取5min，过滤，合并滤液，待容量瓶内溶液冷却后，加蒸馏水至刻度，震荡，摇匀，得茶多酚提取液的茶样提取液，保鲜膜密封，室温下静置24h，次日抽滤，滤液转移至100mL容量瓶中，加蒸馏水定容，得吸附后待测液。将吸附茶多酚的树脂柱加30mL70％的乙醇进行解吸，以1mL／min的流速过柱，收集解吸液，定容至250mL容量瓶中，得解吸后待测液。实验用水均为二次蒸馏水，所用试剂未加特殊说明均为分析纯。

震荡摇匀后得没食子酸储备液，此时没食子酸储备液的浓度为290gmL-1。4、茶多酚含量的测定茶多酚含量的测定参照国标法GB／T83132018茶叶中茶多酚的检测，具体实验内容如下：移液管分别移取水、没食子酸标准溶液、茶多酚待测液1.00mL于试管中，在每个试管中分别加入5.00mLl0％福林酚试剂，震荡，静置5min，加入4.00mL7.5％碳酸钠溶液，摇匀。如果生化试验判定为痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌，由于血清种类不全而未获得血清学分型的最后结果时，可报告为痢疾(或鲍氏)志贺氏菌，型别待定，并送有条件的实验室进一步鉴定。

(二)增菌与分离志贺氏菌因在食品中的存活期较短，当样品采集后应尽快进行检验，如不能立即检查时，可将标本放入冰箱保存。具有以上特性的菌株，疑为志贺氏菌，可做血清凝集试验。挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和半固体各一管，一般应多挑几个菌落以防遗漏。(三)生化学性状根据志贺氏菌的生化学特性，均能发酵葡萄糖，不产生气体(少数福氏6型能产生少量气体)，不发酵水杨苷和侧金盏花醇，不分解尿素，不产生硫化氢，在西蒙氏柠檬酸盐培养基上不生长，V-P为阴性，不发酵乳糖(宋内氏志贺氏菌可迟缓发酵)，不能使赖氨酸脱羧，宋内氏菌和鲍氏B型可使鸟氨酸脱羧，其他均为阴性。

用于分离鉴别的培养基，一般不少于两个，采用中等选择性的HE或SS琼脂平板和弱选择性的麦康凯或EMB琼脂平板，以利于志贺氏菌的阳性检出率。志贺氏菌属在三糖铁琼脂内的反应结果为底层产酸、不产气(福氏志贺菌6型可微产气)，斜面产碱，不产生硫化氢，无动力，在半固体管内沿穿刺线生长。

志贺氏菌(shigella)是人类重要的肠道致病菌之一，食物源性的痢疾爆发(即志贺氏菌食物中毒)，主要是食用了被污染该菌的食品和水所致，其检验方法一般为增菌、分离、生物学试验及血清学鉴定。在液体培养基中呈均匀混浊，无鞭毛，无动力。称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内(固体食品应用均质器以8000--10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品应用灭菌金属匙或玻璃棒研磨使其乳化)，于361℃培养6～8h。取增菌液l环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个，麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板一个，于361℃培养18～24h。

一、检验方法(一)操作步骤1、增菌。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系。志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。声明：本文所用图片、文字版权归原作者所有。

对该菌的检验至今还没有很好的增菌方法，一般采用GN增菌液，缩短增菌时间，6～8h增菌液内细菌轻微生长，即可接种鉴别平板，以免时间较长，其他肠道非致病细菌生长过多而影响志贺氏菌的分离。在做血清学试验的同时，应进一步做苯丙氨酸脱氨酶、赖氨酸脱妒酶，西蒙氏柠檬酸盐和葡萄糖铵尿素、KCN、水杨苷、七叶苷试验，志贺氏菌属均为阴性反应。

挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。必要时应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌，并以生化试验方法做4个生化群的鉴定。

5、结果报告：综合以上生化和血清学的试验结果，判定型别并作出报告。先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查，再用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验，如系B群：福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查，确定菌型。相关链接：志贺氏菌，琼脂，苯丙氨酸脱氨酶，葡萄糖在液体培养基中呈均匀混浊，无鞭毛，无动力。志贺氏菌属在三糖铁琼脂内的反应结果为底层产酸、不产气(福氏志贺菌6型可微产气)，斜面产碱，不产生硫化氢，无动力，在半固体管内沿穿刺线生长。相关链接：志贺氏菌，琼脂，苯丙氨酸脱氨酶，葡萄糖。

志贺氏菌(shigella)是人类重要的肠道致病菌之一，食物源性的痢疾爆发(即志贺氏菌食物中毒)，主要是食用了被污染该菌的食品和水所致，其检验方法一般为增菌、分离、生物学试验及血清学鉴定。用于分离鉴别的培养基，一般不少于两个，采用中等选择性的HE或SS琼脂平板和弱选择性的麦康凯或EMB琼脂平板，以利于志贺氏菌的阳性检出率。

具有以上特性的菌株，疑为志贺氏菌，可做血清凝集试验。一、检验方法(一)操作步骤1、增菌。

四种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价血清1，2，3分别检查，并进一步用1～15各型因子血清确定菌型，如果不是鲍氏志贺氏菌，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和半固体各一管，一般应多挑几个菌落以防遗漏。

声明：本文所用图片、文字版权归原作者所有。志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。(二)增菌与分离志贺氏菌因在食品中的存活期较短，当样品采集后应尽快进行检验，如不能立即检查时，可将标本放入冰箱保存。如果生化试验判定为痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌，由于血清种类不全而未获得血清学分型的最后结果时，可报告为痢疾(或鲍氏)志贺氏菌，型别待定，并送有条件的实验室进一步鉴定。

(三)生化学性状根据志贺氏菌的生化学特性，均能发酵葡萄糖，不产生气体(少数福氏6型能产生少量气体)，不发酵水杨苷和侧金盏花醇，不分解尿素，不产生硫化氢，在西蒙氏柠檬酸盐培养基上不生长，V-P为阴性，不发酵乳糖(宋内氏志贺氏菌可迟缓发酵)，不能使赖氨酸脱羧，宋内氏菌和鲍氏B型可使鸟氨酸脱羧，其他均为阴性。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系。

取增菌液l环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个，麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板一个，于361℃培养18～24h。5、结果报告：综合以上生化和血清学的试验结果，判定型别并作出报告。

在做血清学试验的同时，应进一步做苯丙氨酸脱氨酶、赖氨酸脱妒酶，西蒙氏柠檬酸盐和葡萄糖铵尿素、KCN、水杨苷、七叶苷试验，志贺氏菌属均为阴性反应。称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内(固体食品应用均质器以8000--10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品应用灭菌金属匙或玻璃棒研磨使其乳化)，于361℃培养6～8h。

(二)检验程序二、结果分析判定(一)一般培养性状志贺氏菌为需氧性革兰氏阴性无芽胞杆菌，在普通培养基上易于生长最适pH为6．4～7．8，最适温度为37℃，于10～40℃均能繁殖，在选择性或鉴别培养基上为无色，半透明，微凸起，光滑，湿润，边缘整齐，直径约2mm大小的菌落，但宋内氏志贺氏菌常出现R形菌落。对该菌的检验至今还没有很好的增菌方法，一般采用GN增菌液，缩短增菌时间，6～8h增菌液内细菌轻微生长，即可接种鉴别平板，以免时间较长，其他肠道非致病细菌生长过多而影响志贺氏菌的分离。先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查，再用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验，如系B群：福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查，确定菌型。必要时应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌，并以生化试验方法做4个生化群的鉴定。

挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验通常回收率在90％～110％是正常的。

石墨炉法的标准：铜的精密度为4％，镉的精密度为5％。4、回收率：回收率包括绝对回收率和相对回收率。

标准曲线也是在空白基质中加待测标准品，与标准曲线有重复测定的嫌疑，所以通常采用加样回收试验法。辐射背景低，要低于特征共振辐射强度的1％。